你了解熒光染色原理知識嗎

熒光染色原理：

免疫熒光染色：細胞膜上或細胞內的抗原分子與相應的熒光素標記McAb作用一定時(shí)間后形成帶有熒光素的抗原抗體復合物，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出特定的熒光，其熒光強度與被測定抗原分子含量呈比例關(guān)系，由此可求得被測細胞與標記McAb相對應抗原的表達量和陽(yáng)性細胞百分比。

常用的熒光染料有異硫氰酸熒光素（FITC）、藻紅蛋白（PE）、別藻青蛋白（APC）和Perdinin葉綠素（PerCP）等，經(jīng)488nm激光激發(fā)后其發(fā)射熒光光譜有差別，因而可將其用于標記不同的McAb進(jìn)行單色或多色免疫熒光染色。目前，流式細胞術(shù)有單色、雙色、三色、四色、五色熒光分析，對細胞的分析更加精密、深入。

免疫熒光染色常用方法：

直接免疫熒光法：用一種（單色）或者多種（多色）熒光素標記的McAb染色細胞后測量其熒光強度和陽(yáng)性細胞數。

間接免疫熒光法：用一種McAb與細胞作用后，洗去未結合McAb，再加入熒光素標記的第二抗體（如羊抗鼠IgG-FITC），染色細胞后測量其熒光強度及陽(yáng)性細胞數。